A causa della tendenza a generare un numero elevato di falsi positivi causati dalla contaminazione della banda con sequenze eterogenee, i risultati di visualizzazione differenziali dovranno essere confermati da un'azione alternativa per determinare la forma differenziale di espressione. D'altra parte northern blot o q-PCR sono spesso usati per confermare i risultati, entrambe le tecniche hanno degli svantaggi. Northern blot è limitato dalla sua abilità di sondare solo con un mRNA alla volta, d'altra parte la q-PCR richiede che i trascritti siano abbastanza lunghi da generare primer per la concatenazione e le sonde possono essere costose. In conclusione, il nord inverso è stato utilizzato come mezzo per confermare i risultati della DD-PCR o sequenze con livelli di espressione alterati. In questo caso, la membrana sarà rivestita con prodotti DD-PCR amplificati che sono stati clonati in vettori, sequenziati e reamplificati.
Immagine 250A | northern blot Procedimento inverso generale northern blot utilizzando cDNA da un campione di tester e una libreria SSH. La sovraespressione delle trascrizioni nel campione del tester apparirà come punti più scuri sulla membrana | Cddouglas2 / Attribution-Share Alike 4.0 International | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Revnorthern1.jpg) from Wikimedia Commons
Autore : Milos Pawlowski
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