In questo esempio, un gene dalla libreria genetica dei mammiferi verrà subclonato in un plasmide batterico (piattaforma di destinazione). Il plasmide batterico è un pezzo di circolare DNA che contiene elementi regolatori che consentono ai batteri di produrre un prodotto genico (espressione genica) se è posto nella posizione corretta nel plasmide. Il sito di produzione è affiancato da due siti di taglio enzimatico di limitazione "A" e "B" con estremità adesive incompatibili.
Il mammifero DNA non ha questi siti di limitazione, quindi sono incorporati per estensione sovrapposta PCR. I primer sono progettati per posizionare con attenzione i siti di limitazione, in modo che la codifica della proteina sia integrata e un minimo di amminoacidi extra venga impiantato su entrambi i lati della proteina.
Sia il prodotto PCR contenente il gene dei mammiferi con i nuovi siti di limitazione che il plasmide di destinazione sono soggetti a digestione limitativa, e i prodotti digest sono purificati da gel electrophoresis .
Immagine 274A | Questa immagine subcloning mostra il procedimento di subcloning come indicato a sinistra. | L'uploader originale era Takometer su Wikipedia in inglese. / Attribution 2.5 Generic | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Subcloning.png) from Wikimedia Commons
Author : Yavor Mendel
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